Saf Saposhnikovia divaricata yağı mum ve sabun yapımı için toptan difüzör uçucu yağ yeni kamış yakıcı difüzörler için

kısa açıklama:

 

2.1. SDE'nin hazırlanması

SD'nin rizomları kurutulmuş bir bitki olarak Hanherb Co.'dan (Guri, Kore) satın alındı. Bitki materyalleri Kore Doğu Tıp Enstitüsü'nden (KIOM) Dr. Go-Ya Choi tarafından taksonomik olarak doğrulandı. Bir kupon örneği (sayı 2014 SDE-6) Kore Standart Bitkisel Kaynaklar Herbaryumunda saklandı. Kurutulmuş SD rizomları (320 g), %70 etanol (2 saatlik geri akışla) ile iki kez ekstre edildi ve ekstre daha sonra indirgenmiş basınç altında konsantre edildi. Kaynatma süzüldü, liyofilize edildi ve 4°C'de saklandı. Ham başlangıç ​​materyallerinden kurutulmuş ekstraktın verimi %48.13 (a/a) idi.

 

2.2. Kantitatif Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HPLC) Analizi

Kromatografik analiz, bir HPLC sistemi (Waters Co., Milford, MA, ABD) ve bir fotodiyot dizisi detektörü ile gerçekleştirildi. SDE'nin HPLC analizi için birincilO-glukosilsimifugin standardı, Kore Geleneksel Tıp Endüstrisi Tanıtım Enstitüsü'nden (Gyeongsan, Kore) satın alınmıştır vesaniye-O-glikozilhamaudol ve 4'-O-β-D-glukosil-5-O-metilvisamminol laboratuvarımızda izole edilmiş ve başta NMR ve MS olmak üzere spektral analizlerle tanımlanmıştır.

SDE numuneleri (0,1 mg), %70 etanol (10 mL) içerisinde çözüldü. Kromatografik ayırma bir XSelect HSS T3 C18 kolonu (4,6 x 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, ABD). Mobil faz, 1,0 mL/dakika akış hızında asetonitril (A) ve su (B) içindeki %0,1 asetik asitten oluşuyordu. Çok adımlı bir gradyan programı şu şekilde kullanıldı: %5 A (0 dakika), %5–20 A (0–10 dakika), %20 A (10–23 dakika) ve %20–65 A (23–40 dakika) ). Tespit dalga boyu 210-400 nm'de tarandı ve 254 nm'de kaydedildi. Enjeksiyon hacmi 10.0 idiμL. Üç kromonun belirlenmesi için standart çözeltiler, 7,781 mg/mL'lik nihai konsantrasyonda hazırlandı (birincil-O-glukozilsimifugin), 31,125 mg/mL (4'-O-β-D-glukosil-5-O-metilvisamminol) ve 31,125 mg/mL (saniye-O-glukosilhamaudol) metanol içinde çözüldü ve 4°C'de tutuldu.

2.3. Anti-İnflamatuar Aktivitenin DeğerlendirilmesiIn vitro

2.3.1. Hücre Kültürü ve Örnek Tedavisi

RAW 264.7 hücreleri, Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonundan (ATCC, Manassas, VA, ABD) elde edildi ve %1 antibiyotik ve %5,5 FBS içeren DMEM ortamında büyütüldü. Hücreler %5 CO2 içeren nemlendirilmiş atmosferde 37°C'de inkübe edildi. Hücreleri uyarmak için ortam, 1 °C'de taze DMEM ortamı ve lipopolisakkarit (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ABD) ile değiştirildi.μg/mL, SDE varlığında veya yokluğunda eklendi (200 veya 400μg/mL) ilave 24 saat süreyle.

2.3.2. Nitrik Oksit (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tümör Nekroz Faktörü Tayini-α(TNF-α) ve İnterlökin-6 (IL-6) Üretimi

Hücreler SDE ile muamele edildi ve 24 saat boyunca LPS ile uyarıldı. NO üretimi, önceki bir çalışmaya göre Griess reaktifi kullanılarak nitrit ölçülerek analiz edildi.12] İnflamatuar sitokinler PGE2, TNF-'nin salgılanmasıαve IL-6, üreticinin talimatlarına göre bir ELISA kiti (R&D sistemleri) kullanılarak belirlendi. SDE'nin NO ve sitokin üretimi üzerindeki etkileri, Wallac EnVision kullanılarak 540 nm veya 450 nm'de belirlendi.™mikroplaka okuyucu (PerkinElmer).

2.4. Antiosteoartrit Aktivitesinin DeğerlendirilmesiVivo'da

2.4.1. Hayvanlar

Erkek Sprague-Dawley sıçanları (7 haftalık), Samtako Inc.'den (Osan, Kore) satın alındı ​​ve kontrollü koşullar altında, 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsü ile 12 saat aydınlık/karanlık döngüsünde barındırıldı.°C ve% nem. Sıçanlara laboratuvar diyeti ve su verildiisteğe bağlı. Tüm deneysel prosedürler, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi ve Daejeon Üniversitesi (Daejeon, Kore Cumhuriyeti) Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı.

2.4.2. Sıçanlarda MIA ile OA İndüksiyonu

Hayvanlar, çalışmanın başlatılmasından önce randomize edildi ve tedavi gruplarına atandı (grup başına). MIA çözeltisi (3 mg/50μL %0.9 salin), bir ketamin ve ksilazin karışımı ile indüklenen anestezi altında sağ dizin eklem içi boşluğuna doğrudan enjekte edildi. Sıçanlar rastgele dört gruba ayrıldı: (1) MIA enjeksiyonu yapılmayan salin grubu, (2) MIA enjeksiyonu yapılan MIA grubu, (3) MIA enjeksiyonu yapılan SDE ile tedavi edilen grup (200 mg/kg) ve (4) ) MIA enjeksiyonu ile indometasin-(IM-) ile tedavi edilen grup (2 mg/kg). Sıçanlara MIA enjeksiyonundan 1 hafta önce 4 hafta boyunca SDE ve IM oral yoldan uygulandı. Bu çalışmada kullanılan SDE ve IM dozajı önceki çalışmalarda kullanılanlara dayanıyordu.10,13,14].

2.4.3. Arka Pençe Ağırlık Taşıma Dağılımı Ölçümleri

OA indüksiyonundan sonra arka pençelerin ağırlık taşıma kapasitesindeki orijinal denge bozuldu. Ağırlık taşıma toleransındaki değişiklikleri değerlendirmek için bir kapasite test cihazı (Linton enstrümantasyonu, Norfolk, Birleşik Krallık) kullanıldı. Sıçanlar ölçüm odasına dikkatlice yerleştirildi. Arka ekstremitenin uyguladığı ağırlık taşıma kuvvetinin 3 saniyelik bir süre boyunca ortalaması alındı. Ağırlık dağılım oranı aşağıdaki denklemle hesaplandı: [sağ arka ekstremitedeki ağırlık/(sağ arka ekstremitedeki ağırlık + sol arka ekstremitedeki ağırlık)] × 100 [15].

2.4.4. Serum Sitokin Düzeylerinin Ölçümü

Kan numuneleri 1.500 g'de 10 dakika boyunca 4°C'de santrifüjlendi; daha sonra serum toplandı ve kullanılıncaya kadar -70°C'de saklandı. IL-1 seviyeleriβ, IL-6, TNF-αve serumdaki PGE2, üreticinin talimatlarına göre R&D Systems'den (Minneapolis, MN, ABD) ELISA kitleri kullanılarak ölçüldü.

2.4.5. Gerçek Zamanlı Kantitatif RT-PCR Analizi

Toplam RNA, TRI reaktifi® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) kullanılarak diz eklemi dokusundan ekstre edildi, cDNA'ya ters kopyalandı ve SYBR green (Applied Biosystems) içeren bir TM One Step RT PCR kiti kullanılarak PCR ile amplifiye edildi , Grand Island, NY, ABD). Gerçek zamanlı kantitatif PCR, Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistemi (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ABD) kullanılarak gerçekleştirildi. Primer dizileri ve prob dizisi Tablo'da gösterilmektedir.1. Örnek cDNA'ların alikuotları ve eşit miktarda GAPDH cDNA, üreticinin talimatlarına göre (Applied Biosystems, Foster, CA, ABD) DNA polimeraz içeren TaqMan® Universal PCR ana karışımı ile amplifiye edildi. PCR koşulları, 40 döngü için 50°C'de 2 dakika, 94°C'de 10 dakika, 95°C'de 15 saniye ve 60°C'de 1 dakika idi. Hedef genin konsantrasyonu, üreticinin talimatlarına göre karşılaştırmalı Ct (amplifikasyon grafiği ile eşik arasındaki çapraz noktada eşik döngü sayısı) yöntemi kullanılarak belirlendi.

FOB Fiyatı:0,5 - 9.999 ABD Doları / Adet

Min.Sipariş Miktarı:100 Adet/Adet

Tedarik Yeteneği:Aylık 10000 Adet / Adet